时间分辨荧光微球是否是免疫荧光定量层析的最佳荧光标记物？

          时间分辨荧光微球是一种包埋了成千上万个配位稀土离子的荧光微球。这些配位稀土金属离子(Eu、Tb、Sm、Dy)具有荧光效应，并且荧光寿命较长，可达1-2ms，普通的荧光染料分子只有几十个纳秒，而普通蛋白质只有几个纳秒，从而可以通过收集不同时间段的荧光来提高检测灵敏度。

图1：时间分辨荧光微球的时间衰变图

同时，配位稀土离子包裹在微球中，成功解决了稀土离子在水中的不稳定性。因此微球荧光强度不容易受外界环境的影响；其次这种配位稀土离子所发射的荧光Stokes位移大，一般在340nm激发，610nm左右接收，使发射光谱与激发光谱完全分离。这样减少了因为微球浓度过高，出现微球之间荧光发生内猝灭现象，体现在试条性能上是：试条灵敏度高、线性范围宽。

从仪器光路设计来看，由于时间分辨荧光微球stokes位移大，激发峰与发射峰完全分离，因此减少了仪器滤光片的使用量，简化了仪器的调试过程，因此仪器开发成本与难度大大降低。

综合以上性能，时间分辨荧光微球是一种非常不错的荧光微球。但是这种微球也不是完全没有缺点，他也存在以下几个问题：

1）、时间分辨荧光微球在发射光长时间的照射下，荧光强度是不稳定的。其中主要原因是微球对湿度非常敏感，如果微球在干燥条件下（湿度30%以下，美牛微球在40%以下），即使发射光长期照射，微球的荧光强度也不会降低。由于微球对湿度敏感，因此用时间分辨荧光微球做仪器配套的标准荧光色卡条不行。美牛生物提供了一种高稳定的质控微球\质控卡可以解决仪器遇到的问题。

2）、时间分辨荧光微球是一种白色微球，在层析试条上不能观察到具体荧光强度的大小。这样非常不利于肉眼直观的判断试条是否检测过，因此容易出现试条重复检测的情况发生。

3）、时间分辨荧光微球的激发光源一般是近紫外340nm的LED。这种LED不常见，价格比较贵。

      虽然时间分辨荧光微球具有上面的缺点，但是与这种微球的优点相比以及与常规的荧光微球相比较，这种微球可能是目前层析试条最理想的微球载体。